Dados do Trabalho

Título

QUANTIFICAÇÃO MOLECULAR DA CARGA PARASITÁRIA POR MEIO DA PCR EM TEMPO REAL (qPCR) EM PACIENTES COM DIFERENTES FORMAS CLINICAS DE LEISHMANIOSE TEGUMENTAR AMERICANA.

Introdução

No estado da Bahia, oitenta por cento (80%) dos casos de leishmaniose são causados
pela L.braziliensis. Atualmente, o índice de falha ao tratamento com antimonial pentavalente, tem
aumentado e a carga parasitária pode contribuir para um desfecho desfavorável em pacientes
infectados. Com a validação anterior para detecção de leishmania por qPCR, propomos agora uma
estratégia para quantificação de DNA de L.braziliensis em diferentes formas clínicas para associar
posteriormente com desfecho clinico da doença.

Objetivo (s)

Quantificação de DNA de L.braziliensis em biópsias de pacientes com leishmaniose
tegumentar para o acompanhamento da falha terapêutica nos pacientes da área endêmica de Corte
Pedra-BA.

Material e Métodos

Foram selecionados oitenta amostras de DNA extraído de biópsias de
pacientes com diferentes formas clínicas de leishmaniose atendidos no posto de saúde de Corte de
Pedra. Utilizando ensaios Taqman com primers que reconhecem o DNA do minicírculo do
cinetoplasto (KDNA) e primers que reconhecem sequências ribossomais humana (18S rRNA)
quantificamos as amostras de pacientes a partir de uma curva padrão seriada com 10 5 promastigotas
e correlacionamos a carga parasitária com a medida relativa da concentração do alvo (Ct). Além
disso, correlacionamos os valores dessa medida ao número de amastigotas identificado por
imunohistoquimica para validação do método.

Resultados e Conclusão

A carga parasitária foi positivamente correlacionada ao o número de
amastigotas detectadas por imunohistoquímica. Além disso, observamos diferenças nas cargas
parasitárias entre diferentes formas clínicas com tendência maior para os pacientes com
leishmaniose cutânea na fase recente (menos de 20 dias de doença). Esses dados indicam que a
qPCR proposta nesse estudo pode ser útil na determinação de carga parasitária de L.brazileinsis em
pacientes com leishmaniose.
O ensaio de PCR quantitativo neste estudo permitiu a detecção e quantificação absoluta
da carga parasitária inclusive em amostras consideravelmente baixa e pode resultar em uma
ferramenta importante para a tomada de decisões durante o tratamento de pacientes da área endêmica
de Corte de Pedra.

Palavras-chave

Leishmaniose, Carga parasitária, qPCR, imunhistoquimica.

Agradecimentos

Agradecemos a equipe do LAPEC e Hupes pela colaboração, ao Centro de refência em Leishmaniose em Corte de Pedra- Bahia e a agência financiadora CNPq através do INCT-DT.